革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。未經(jīng)染色之細(xì)菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，而用以分類鑒定。革蘭氏染色屬復(fù)染法。

革蘭氏染色液原理：

通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。染色的差異主要是由于陰性與陽性細(xì)菌細(xì)胞壁的差異所引起的。

革蘭氏染色液材料：

1.葡萄球菌和大腸桿菌混合菌液。

2.結(jié)晶紫染色液

3.革蘭氏碘液

4.95%酒精。

5.番紅染液

6.載玻片方法、涂片標(biāo)本的制備（見實(shí)驗(yàn)一）

革蘭氏染色法1.初染：在上述已固定的涂片上，滴加結(jié)晶紫染液，染色1分鐘，水洗。

2.媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1-3分鐘，水洗3.脫色：滴加95%酒精，并頻頻搖動玻片，至無紫色脫出為止（約20秒），水洗復(fù)染：加番紅染液，復(fù)染半分鐘，水洗，用吸水紙印干后，油鏡檢查結(jié)果：視野中可以察見兩種細(xì)菌葡萄球菌：紫色、球形、葡萄狀排列。

大腸桿菌：紅色、桿狀、散在排列。

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