熒光定量Q-PCR檢測知識“大攻略”！
熒光定量Q-PCR檢測的理論依據是什通過特定的待擴增基因片段起始含量越大，則指數擴增過程越短，當擴增速率趨于穩(wěn)定后，則無論原來樣品中起始模板含量多少，終擴增片段的含量通常是一樣的。
理想的擴增結果：Y=X×2n；
其中Y代表擴增產物量，X代表PCR反應體中的原始模板數n為擴增次數；理論上PCR擴增效率為100%，PCR產物隨著循環(huán)的進行成指數增長，但實際上：DNA的每一次復制都不*，即每一次擴增中，模板不是呈2的倍增長；實際應為：Y=X(1+E)n，其中E代表擴增效率：E=參與復制的模板/總模板，通常E≤1，E在整個PCR擴增過程中不是固定不變的。通常X在1-105拷貝、循環(huán)次數n≤30時，E相對穩(wěn)定，原始模板以相對固定的指數形式增加，適合定量分析，這也就是所謂的指數期；隨著循環(huán)次數n的增加（>30次），E值逐漸減少，Y呈非固定的指數形式增加，后進入平臺期。
熒光定量Q-PCR檢測的理論模式：
PCR是對原始待測模板核酸的一個擴增過程，任何干擾PCR指數擴增的因素都會影響擴增產物的量，使得PCR擴增終產物的數量與原始模板數量之間沒有一個固定的比例關系，通過檢測擴增終產物很難對原始模板進行準確定量。
PCR擴增通式：
1.Tn=T0（1+E）n；
2.Tn=Tn-1（1+E）n。
注：[0其中E表示擴增效率，n為循環(huán)數，Tn表示在n個周期后PCR產物的數量，Tn-1表示在n-1個周期后PCR產物的數量，T0為原始模板數量。設定PCR到達指數擴增期時，產生一定的熒光(熒光依賴于某一循環(huán)擴增產物的總量，即特定的拷貝數K，為常數，大約在1010左右)高于背景為儀器所識別，此時的循環(huán)數為CP,也就是K=T0（1+E）CP，取對數即：
lg K=lg T0+CP*lg(1+E)；
CP=-1/lg(1+E)*lg T0+lgk/lg(1+E)。
由于對一特定的PCR而言，E與K均為常數，故上式為循環(huán)數（CP）對原始模板拷貝數的對數（lg T0）一次方程，其標準形式y(tǒng)=kx+b,該直線的斜率為-1/lg(1+E)，在橫坐標上的截距為lgk/lg(1+E)，也是熒光定量PCR所謂的標準曲線。
根據PCR擴增過程中是否加入某種標記物、標記物的種類以及后檢測的信號的不同可分為四種類型：
直接定量檢測法；同位素標記定量；酶標記定量檢測法；熒光定量Q-PCR技術。
熒光定量PCR主要原理發(fā)射波長與受體熒光染料光染料吸收供體熒光傳遞的能量而激發(fā)出另一波長的熒光，同時將供體熒光淬滅。
